吐逊艾力·艾孜提力^1,4 , 侯婉莹³ , 郭庆元^1,4 , 古丽尼沙·卡斯木⁵ , 代毅^1,4 , 李世访^2* , 麦合木提江·米吉提^1,4*

1新疆农业大学农学院,乌鲁木齐, 830052; 2中国农业科学院植物保护研究所,植物病虫害生物学国家重点实验室,北京, 100193; 3中国农业科学院烟草研究所,青岛, 266101; 4新疆自治区高校农作林有害生物监测与安全防控重点实验室,乌鲁木齐, 830052; 5新疆林业科学院,乌鲁木齐, 830052
作者    通讯作者
《分子植物育种》印刷版, 2021 年, 第 19 卷, 第 22 篇   
收稿日期: 2020年06月07日    接受日期: 2020年06月15日    发表日期: 2021年12月12日

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为了快速检测危害无花果的病毒种类，本研究建立了一种同时检测 3种无花果病毒的多重 RT-PCR检测体系，包括无花果斑点相关病毒(fig fleck-associated virus, FFkaV)、无花果叶斑相关病毒(fig leaf mottleassociated virus, FLMaV)和无花果花叶病毒(fig mosaic virus, FMV)。根据三种病毒基因保守区域设计特异性引物，分别对 cDNA用量、dNTPs用量、EasyPfu DNA聚合酶用量、MgSO₄用量、退火温度和引物组合进行优化，并利用 RT-PCR进行验证。结果显示，总体积为 25 μL的反应体系中EasyPfu DNA聚合酶(2.5 U/μL)用量 0.7 μL、cDNA用量 1.0 μL、dNTPs (2.5 mmol/L)用量 2.5 μL、MgSO₄ (50 mmol/L)用量 1.2 μL、引物组合为1.5 μL，1.0 μL，0.3 μL、ddH₂O为 14 μL、退火温度 56 ℃时能够扩增出清晰的目的条带，该检测体系的检测极限为 6.8 ng/μL的 cDNA。田间样品的检测结果表明，该方法能够快速、准确地检测这 3种无花果病毒，可用于田间无花果样品的检测。本研究建立的多重 RT-PCR检测体系为无花果病毒的检测与防控提供技术支持。

无花果；病毒；多重 RT-PCR